以下是 天正信達(dá)人胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1) ELISA試劑盒? 的標(biāo)準(zhǔn)化使用說(shuō)明及操作指南：

　　BS-0032 人胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA試劑盒

　　一、檢測(cè)原理

　　采用 ?雙抗體夾心法?：

　　預(yù)包被抗人IGF-1抗體的微孔板捕獲樣本中的目標(biāo)蛋白

　　加入標(biāo)記的二抗與靶蛋白結(jié)合，形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物

　　HRP催化TMB顯色，450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，濃度與吸光度呈正相關(guān)

　　二、核心參數(shù)

　　項(xiàng)目? ?規(guī)格?

　　檢測(cè)范圍? 62.5-4000pg/mL(部分品牌31.25-2000pg/mL)

　　靈敏度? ≤15.35pg/mL 或 18.75pg/mL

　　樣本類(lèi)型? 血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿

　　變異系數(shù)? 板內(nèi)/板間CV均<10%

　　回收率? 83-108%(血清/血漿)

　　三、試劑盒組成

　　預(yù)包被微孔板?：96孔(透明或白色)

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品?：通常含1瓶(400ng/mL或6000pg/mL起始)

　　檢測(cè)抗體?：標(biāo)記抗IGF-1抗體

　　顯色系統(tǒng)?：TMB底物A/B液、終止液(2M硫酸)

　　濃縮洗滌液?：需1:25稀釋使用

　　四、實(shí)驗(yàn)步驟

　　1. ?樣本預(yù)處理?

　　血清/血漿?：室溫靜置20分鐘后，2000-3000rpm離心20分鐘取上清

　　組織勻漿?：PBS(pH7.4)按1:9重量比勻漿，離心取上清

　　保存條件?：-20℃分裝，避免反復(fù)凍融(≤3次)

　　2. ?標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備?

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后梯度稀釋(如6000→93.75pg/mL)

　　3. ?檢測(cè)流程?

　　加樣：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本100μL/孔，37℃孵育120分鐘

　　洗滌：扣干殘液，洗板3-6次(每次浸泡1-2分鐘)

　　加酶標(biāo)抗體：100μL/孔，37℃ 60分鐘

　　顯色：TMB避光反應(yīng)15分鐘→終止液終止

　　讀值：450nm主波長(zhǎng)，630nm參比

　　五、注意事項(xiàng)

　　質(zhì)量控制?

　　每板需設(shè)空白孔和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)孔(R2≥0.99)

　　樣本OD值超出范圍需稀釋復(fù)測(cè)

　　操作規(guī)范?

　　試劑使用前需平衡至室溫(20-25℃)

　　避免底物接觸金屬離子或強(qiáng)光

　　數(shù)據(jù)解讀?

　　建議使用四參數(shù)擬合(4PL)計(jì)算濃度

　　六、常見(jiàn)問(wèn)題

　　顯色異常?：檢查T(mén)MB是否避光保存，HRP是否失活

　　邊緣效應(yīng)?：預(yù)溫育板條至37℃可減少孔間差異

　　注：不同品牌組分可能差異(如預(yù)包被板/凍干抗體)，需嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，以上資料僅供參考，具體請(qǐng)咨詢(xún)技術(shù)老師或是供應(yīng)商。

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