天正信達解說ELISA試劑盒容易操作失誤的地方

　　以下是天正信達對ELISA試劑盒操作中容易失誤的關鍵環(huán)節(jié)及專業(yè)解決方案，綜合實驗操作要點和常見問題整理：

　　一、試劑準備階段

　　試劑平衡不足?

　　未室溫平衡30分鐘直接使用，導致反應溫度不均(尤其HRP酶在低溫下活性降低)

　　解決方案：提前取出試劑盒，平衡至22-25℃后再開封

　　標準品復溶錯誤?

　　凍干粉未離心溶解或使用非配套稀釋液，造成濃度偏差

　　解決方案：復溶前3000rpm離心1分鐘，嚴格按說明書體積稀釋

　　二、樣本處理環(huán)節(jié)

　　血清分離不當?

　　血液未充分凝固(<30分鐘)或離心力不足(<2000g)，導致纖維蛋白原殘留引發(fā)假陽性

　　解決方案：37℃靜置1-2小時后，3000g離心20分鐘

　　樣本保存失誤?

　　反復凍融(>3次)或-20℃保存超1個月，使抗原降解

　　解決方案：分裝凍存于-80℃，避免凍融循環(huán)

　　三、加樣操作要點

　　移液器使用錯誤?

　　未校準移液器或吸頭密封不嚴，導致加樣量波動(誤差>5%)

　　解決方案：每年校準移液器，加樣時吸頭緊貼孔底避免氣泡

　　加樣順序混亂?

　　先加酶標抗體后加樣本，造成非特異性結合

　　解決方案：嚴格按說明書"樣本→抗體→底物"順序操作

　　四、溫育過程控制

　　溫度與時間偏差?

　　使用普通培養(yǎng)箱(非水浴箱)導致溫度波動>1℃

　　解決方案：校準孵育箱溫度，禁止疊放反應板

　　蒸發(fā)問題?

　　未使用濕盒或封板膜，邊緣孔液體蒸發(fā)致濃度升高

　　解決方案：孵育時反應板置于鋪濕紗布的密閉盒內

　　五、洗滌與顯色

　　洗滌不?

　　手工洗板拍打力度不均或洗板機針頭堵塞，殘留物增加背景

　　解決方案：每孔注滿洗液，靜置1分鐘后拍干

　　顯色控制不當?

　　顯色超過15分鐘未終止，導致OD值飽和

　　解決方案：每隔5分鐘觀察顏色變化，強陽性孔提前終止

　　六、數據讀取誤區(qū)

　　讀板延遲?

　　終止反應后>10分鐘讀數，酸性環(huán)境使顯色物分解

　　解決方案：終止后5分鐘內完成讀數

　　波長設置錯誤?

　　TMB底物誤用490nm(正確應為450nm)

　　解決方案：核對酶標儀濾光片匹配底物類型

　　關鍵建議?：

　　每批次實驗設置復孔(CV<15%)和質控品

　　不同批號試劑禁止混用，開封后1個月內用完

　　溶血/脂血樣本需離心過濾后檢測

　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術老師或品牌供應商。

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