ELISA試劑盒組織勻漿液的細(xì)節(jié)處理及使用原則

　　以下是天正信達(dá)ELISA試劑盒組織勻漿液的細(xì)節(jié)處理及使用原則的綜合指南，基于最新實(shí)驗(yàn)規(guī)范整理：

　　一、組織勻漿液制備關(guān)鍵步驟

　　樣本預(yù)處理?

　　用預(yù)冷PBS(0.01M, pH 7.4)沖洗組織，清除表面血液和雜質(zhì)

　　去除筋膜/脂肪等冗余組織，避免非特異性干擾

　　勻漿比例控制?

　　推薦組織與緩沖液重量體積比1:5~1:9(如1g組織加5-9mL PBS)

　　需記錄實(shí)際比例以便數(shù)據(jù)校正

　　裂解方法選擇?

　　機(jī)械勻漿?：冰浴條件下使用玻璃勻漿器研磨至糜狀

　　超聲輔助?：功率200W超聲3-5秒/次(冰浴間歇操作)

　　凍融循環(huán)?：限2次以內(nèi)(-80℃冷凍→室溫解凍)

　　離心參數(shù)?

　　4℃ 5000×g離心5-10分鐘取上清

　　肝/腦等特殊組織需16000×g離心30分鐘

　　二、緩沖液配置原則

　　基礎(chǔ)緩沖液?

　　推薦含蛋白酶抑制劑的預(yù)冷PBS(pH 7.2-7.4)

　　特殊樣本需添加：

　　• 1% Triton X-100(膜蛋白提取)

　　• 200μM PMSF(絲氨酸蛋白酶抑制)

　　抑制劑使用?

　　臨用前加入抑制劑混合物(1:100比例)

　　避免含NaN3的緩沖液(抑制HRP活性)

　　三、保存與質(zhì)控要求

　　分裝存儲(chǔ)?

　　短期：4℃保存≤1周

　　長期：-80℃分裝(避免反復(fù)凍融)

　　使用前處理?

　　室溫緩慢復(fù)融(禁止加熱)

　　再次離心去除沉淀物

　　質(zhì)控指標(biāo)?

　　蛋白濃度建議0.5-2mg/mL

　　溶血樣本需檢測血紅蛋白干擾(OD414nm<0.2)

　　四、洗液使用規(guī)范

　　匹配原則?

　　優(yōu)先使用原裝配套洗液

　　禁止混用不同廠家/批號洗液

　　替代方案?

　　緊急情況下可用同項(xiàng)目其他品牌洗液

　　需驗(yàn)證pH(7.2-7.6)和導(dǎo)電率

　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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