EdU-488細(xì)胞增殖檢測試劑盒(適用于FACS、FM)

產(chǎn)品信息 

產(chǎn)品描述

      EdU-488細(xì)胞增殖檢測試劑盒(FuHeng EdU Cell Proliferation Kit with AlexaFluor 488)，是一種利用核苷滲入法對細(xì)胞增殖情況進(jìn)行快速、 簡單、高靈敏檢測的試劑盒。其原理為：試劑盒中的EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)是一種胸苷(T)類似物，EdU可以在在 細(xì)胞周期的S期中替代胸苷摻入到新合成的DNA中；另一方面，EdU上的乙炔基能與疊氮 化物(如熒光探針Alexa Fluor 488 Azide)通過Cu+的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑 環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點擊反應(yīng)(Click reaction) (圖1) 。通過點擊反應(yīng)，新合成的DNA會被綠色熒光標(biāo)記，然后通過檢測熒光信號實現(xiàn)細(xì)胞增殖的檢測。

圖1. EdU法中的點擊反應(yīng)原理圖。 摻入到細(xì)胞DNA中的EdU與熒光探針或sws等標(biāo)記的疊氮化物，在銅離子的催化下發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，使細(xì)胞DNA標(biāo)記上熒光探針或sws。

<p    細(xì)胞增殖檢測是評估細(xì)胞活性、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果等的基礎(chǔ)實驗手段。 細(xì)胞增殖檢測的方法按照原理通常可以分為五類：膜損傷檢測、代謝活性檢測、ATP水平測定、 DNA合成檢測和細(xì)胞熒光標(biāo)記檢測法。目前的的檢測細(xì)胞增殖的方法是直接檢測細(xì)胞中DNA的合成，即核苷滲入法。以前常用的核苷滲入法是BrdU(胸腺嘧啶核苷酸類似物)法，但BrdU法的缺點是需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合，導(dǎo)致了DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的破壞，影響了其他染料的結(jié)合染色，導(dǎo)致染色彌散，準(zhǔn)確性降低等問題。 EdU法作為新型的核苷滲入法具有以下優(yōu)點：

◆安全-----不使用[3H]thymidine，無放射性污染。

◆ 簡單-----基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測方法，簡單高效，僅需三步： EdU孵育；細(xì)胞固定；熒光檢測。無需DNA變性和孵育抗體。

◆ 快速-----無需過夜，省卻抗原抗體反應(yīng)。整個檢測過程只需 2.5 小時，大大縮短實驗周期。

◆ 準(zhǔn)確-----標(biāo)記率高且無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細(xì)胞核邊緣清晰完。

◆ 靈敏-----無需抗體，檢測染料僅為BrdU抗體的1/500，更容易擴(kuò)散，即使單個增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測。

◆ 兼容-----對樣品幾乎無損傷，允許與多種抗體或熒光蛋白同時標(biāo)記，能夠同時檢測細(xì)胞其他性狀特征。

本試劑盒適用于培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品，也適用于組織切片，可以檢測到細(xì)胞或組織樣本中的單個增殖細(xì)胞，也可以對細(xì)胞或組織樣本總體的細(xì)胞增殖情況進(jìn)行定量分析。本試劑盒包含EdU法檢測所需要的所有組份，同時提供了藍(lán)色細(xì)胞核染料Hoechst 33342，可以用來復(fù)染所有細(xì)胞核，也可用于細(xì)胞周期分析。使用本試劑盒所做結(jié)果可以用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀或熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測， 也可以用于高內(nèi)涵篩選(High-Content Screening, HCS)。

光譜特性：488-Azide：綠色熒光，Ex/Em=491/518 nm；Hoechst 33342：藍(lán)色熒光， Ex/Em=346/460nm, bound to DNA。

產(chǎn)品組分

運輸和保存方法

-20℃保存， 一年有效。488-Azide和Hoechst 33342(1000X)須避光保存。

使用方法

1. 需自備試劑

（1）10mM PBS, pH7.2-7.6

（2）固定液-----4%多聚甲醛in PBS 。

（3）洗滌液-----3% BSA in PBS , pH7.2-7.6。

（4）通透液-----0.3~0.5% Triton X-100 in PBS。

（5）去離子水或超純水。

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