豚鼠白介素-2(IL-2)Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書

　　以下是天正信達(dá)豚鼠白介素-2(IL-2)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書摘要，綜合整理自多個(gè)來(lái)源：

　　一、實(shí)驗(yàn)原理?

　　采用雙抗體夾心法檢測(cè)樣本中IL-2濃度。包被抗體與樣本中的IL-2結(jié)合后，依次加入生物素化抗體和HRP標(biāo)記的鏈霉親和素，最終通過(guò)TMB顯色反應(yīng)測(cè)定OD值，濃度與吸光度成正比。

　　二、試劑盒組成?

　　預(yù)包被微孔板?：96孔聚苯乙烯板(12孔×8條)

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉(2ng/瓶或160ng/L)，需用稀釋液重構(gòu)

　　檢測(cè)試劑?：

　　酶標(biāo)抗體工作液(HRP標(biāo)記)

　　生物素化抗體工作液

　　輔助溶液?：

　　30×濃縮洗滌液(需1:20~1:30稀釋)

　　TMB顯色液(A/B液分裝)

　　終止液(硫酸溶液)

　　三、樣本處理?

　　樣本類型?：血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿

　　保存條件?：

　　短期：2-8℃保存48小時(shí)內(nèi)檢測(cè)

　　長(zhǎng)期：-20℃或-70℃凍存，避免反復(fù)凍融

　　四、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?

　　原倍標(biāo)準(zhǔn)品用1ml稀釋液重構(gòu)(如2ng/ml)

　　梯度稀釋：

　　取8管，每管加稀釋液300μl

　　首管加入標(biāo)準(zhǔn)品后倍比稀釋，第7管棄去300μl，第8管為空白對(duì)照

　　五、實(shí)驗(yàn)步驟?

　　加樣?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品/樣本每孔100μl，37℃孵育120分鐘

　　洗滌?：棄液后加洗滌液，重復(fù)4-6次，拍干

　　抗體孵育?：

　　加生物素化抗體100μl，37℃ 60分鐘

　　洗板后加酶標(biāo)試劑50μl，37℃ 30分鐘

　　顯色與終止?：

　　加TMB 100μl，避光反應(yīng)15分鐘

　　加終止液50μl，15分鐘內(nèi)測(cè)450nm OD值

　　六、注意事項(xiàng)?

　　溫度控制?：所有試劑使用前需平衡至室溫(20-25℃)

　　避免污染?：

　　不同試劑避免交叉污染

　　勿使用含NaN3的樣本(抑制HRP活性)

　　數(shù)據(jù)計(jì)算?：以標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合濃度，乘以稀釋倍數(shù)

　　七、儲(chǔ)存與有效期?

　　未開封試劑盒：2-8℃保存，有效期6個(gè)月

　　開封后：微孔板需密封防潮，部分試劑需-20℃保存

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　　注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)際標(biāo)準(zhǔn)，具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師。

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