ELISA實(shí)驗(yàn)中，血液樣本的收集與處理重要性，您了解嗎?

　　在ELISA實(shí)驗(yàn)中，血液樣本的收集需使用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管。血清樣本需讓血液自然凝固后離心分離，一般室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，再以1000×g離心20分鐘收集上清液。血漿樣本則需加入抗凝劑，常用EDTA、肝素鈉或枸櫞酸鈉，采集后30分鐘內(nèi)以1000×g離心15分鐘獲取。處理過程中要避免溶血和細(xì)菌污染，它們會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。保存時(shí)，應(yīng)將血清或血漿分裝，并儲(chǔ)存在-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融。正確的收集和處理方法能確保血液樣本的質(zhì)量，為ELISA實(shí)驗(yàn)提供可靠的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

　　ELISA血液樣本收集與處理操作要點(diǎn)‌

　　一、樣本類型選擇‌

　　血清‌

　　采集后室溫靜置‌10分鐘~2小時(shí)‌(或4℃過夜)使血液凝固，隨后‌2000-3000×g離心20分鐘‌取上清。

　　避免溶血(紅細(xì)胞破裂會(huì)釋放干擾物質(zhì))及細(xì)菌污染。

　　血漿‌

　　需使用抗凝劑(如EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉)，采集后‌30分鐘內(nèi)混勻‌，離心條件同血清。

　　高血脂或溶血樣本需預(yù)處理(如二次離心)。

　　全血‌

　　直接采集后需立即加入抗凝劑，短期可存于‌4℃(≤2天)‌，長(zhǎng)期需分裝凍存。

　　二、關(guān)鍵操作步驟‌

　　離心規(guī)范‌

　　血清/血漿離心轉(zhuǎn)速通常為‌2000-3000×g‌，時(shí)間‌15-20分鐘‌，低溫(2-8℃)操作更佳。

　　若上清有沉淀，需重復(fù)離心。

　　分裝與保存‌

　　短期使用可存于‌-20℃‌，長(zhǎng)期建議‌-80℃‌，避免反復(fù)凍融(≤3次)。

　　分裝體積按單次實(shí)驗(yàn)用量設(shè)定。

　　特殊處理‌

　　溶血樣本‌：需高速離心(如10000×g)或過濾去除血紅蛋白。

　　組織/細(xì)胞樣本‌：需裂解后離心取上清，避免細(xì)胞碎片干擾。

　　三、注意事項(xiàng)‌

　　抗凝劑選擇‌：EDTA可能干擾某些指標(biāo)(如鈣離子檢測(cè))，需參照試劑盒說明。

　　無(wú)菌操作‌：全程使用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素耗材，避免外源性污染。

　　質(zhì)控要求‌：每批次實(shí)驗(yàn)需包含陰/陽(yáng)性對(duì)照，確保結(jié)果可靠性。

　　通過規(guī)范操作可顯著提升ELISA檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

　　正確采集血液樣本的方法‌

　　一、采血前準(zhǔn)備‌

　　患者狀態(tài)‌

　　需在平靜、休息狀態(tài)下采樣，避免情緒激動(dòng)或劇烈運(yùn)動(dòng)影響檢測(cè)結(jié)果(如血糖、血鉀可能臨時(shí)升高)。

　　空腹要求：部分項(xiàng)目(如血糖、血脂)需空腹8-12小時(shí)，但非所有檢測(cè)均需禁食。

　　消毒與器械‌

　　穿刺部位用復(fù)合碘或75%酒精消毒，范圍≥5cm×5cm，由內(nèi)向外旋轉(zhuǎn)擦拭2遍。

　　使用一次性無(wú)菌采血針和真空采血管，避免交叉污染。

　　二、采血操作步驟‌

　　靜脈采血(常用)‌

　　部位選擇‌：成人選擇肘前靜脈(如貴要靜脈、頭靜脈)，嬰幼兒可選頸外靜脈或股靜脈。

　　止血帶使用‌：扎于穿刺點(diǎn)上方6-10cm，時(shí)間≤1分鐘，避免血液濃縮。

　　穿刺技巧‌：針頭斜面朝上，與皮膚呈20°-30°角進(jìn)針，見回血后降低角度至5°繼續(xù)進(jìn)針。

　　采血后處理‌：先松止血帶，再拔針，用棉簽按壓穿刺點(diǎn)1-2分鐘防血腫。

　　毛細(xì)血管采血(指尖/耳垂)‌

　　部位‌：成人取無(wú)名指指腹內(nèi)側(cè)，嬰幼兒可選足跟或大腳趾。

　　操作‌：消毒后刺入2-3mm，棄去第一滴血(含組織液)，自然流出血液收集。

　　特殊注意事項(xiàng)‌

　　避免從輸液側(cè)肢體采血，防止藥物干擾。

　　血培養(yǎng)需嚴(yán)格無(wú)菌操作，成人每瓶采血量5-10ml。

　　三、樣本處理與保存‌

　　抗凝劑選擇‌

　　EDTA管(血常規(guī))、肝素管(生化檢測(cè))、檸檬酸鈉管(凝血功能)需按檢測(cè)要求選用。

　　避免樣本異常‌

　　溶血‌：禁止擠壓穿刺部位，采血后需沿試管壁緩慢注入血液。

　　脂血‌：空腹采血可減少干擾，嚴(yán)重脂血需離心后檢測(cè)。

　　保存條件‌

　　生化檢測(cè)樣本：2-8℃保存≤4小時(shí)，長(zhǎng)期需-20℃或-70℃凍存。

　　四、常見錯(cuò)誤與規(guī)避‌

　　錯(cuò)誤操作‌：止血帶超時(shí)、從輸液針頭采血、擠壓局部取血均會(huì)導(dǎo)致結(jié)果失真。

　　記錄要求‌：需標(biāo)注采血時(shí)間、患者信息及特殊狀況(如輸液時(shí)采血)。

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