動(dòng)物組織直接PCR試劑盒

產(chǎn)品描述

動(dòng)物組織直接 PCR 試劑盒是一款可直接對(duì)不同動(dòng)物組織進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增的試劑盒，適應(yīng)性廣、穩(wěn)定性強(qiáng)、操作簡易。

本試劑盒采用的裂解緩沖液體系，可以快速的裂解多種動(dòng)物組織樣品并釋放出基因組 DNA，如昆蟲足翅、鼠尾、 鼠趾、動(dòng)物皮膚和內(nèi)臟等。裂解產(chǎn)物可以用于 DNA 提取純化、也可以直接用于 PCR 反應(yīng)、也可以在 -20℃ 或以下溫度條件下長期保存?zhèn)溆谩?/span>

本試劑盒中提供的 2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很強(qiáng)的擴(kuò)增兼容性，不需要額外采用純化提取試劑去除裂解產(chǎn)物中的各種殘骸雜質(zhì)，能直接以待測(cè)樣品裂解液為模板，進(jìn)行高效特異性擴(kuò)增。該試劑為 2 倍濃縮 PCR 反應(yīng)混合液，包含了用于 PCR 擴(kuò)增除模板和引物外的所有組分，大大簡化擴(kuò)增步驟的操作過程，降低污染機(jī)率。

該試劑盒可用于動(dòng)物基因擴(kuò)增檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物基因型鑒定等。

產(chǎn)品組分

a）Lysis Buffer 和 Proteases 兩種組分配合使用于動(dòng)物組織裂解。

b）2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含 PCR 擴(kuò)增所需要的熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合酶、dNTP 和 Mg2+等；已混有溴酚藍(lán)染料作為電泳指示劑， PCR 產(chǎn)物可以直接進(jìn)行電泳。

c）5 × PCR Enhancer ：高GC含量擴(kuò)增（如大于65%）時(shí)，建議使用5 × PCR Enhancer。

動(dòng)物組織直接PCR試劑盒

運(yùn)輸方法

冰袋運(yùn)輸，有效期1年。

保存方式

1. 試劑 10184-A【Lysis Buffer】為動(dòng)物組織裂解緩沖液，建議保存于2-8℃。 

2. 試劑 10184-B【Proteases】為動(dòng)物組織裂解劑，使用時(shí)請(qǐng)勿長久開蓋，建議保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。

3. 試劑 10184-C【2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)】，建議保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。

4. 試劑 10184-D【5 × PCR Enhancer】，建議保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。

操作方法

1. 在離心管中加入 200 μL Lysis Buffer和2 μL Proteases，輕輕渦旋混勻。

2. 取約 10 mg（長度2 mm左右）動(dòng)物組織，置于上述離心管中，輕輕渦旋混勻。

3. 55℃孵育5-30 min，然后 95℃處理5 min。 

4. 12000 rpm 離心2 min。

5. 將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管，-20℃保存或直接用于 PCR 擴(kuò)增。

【注】：

a）Lysis Buffer 與 Proteases 混合后盡快使用，不宜長期保存；大量樣本操作時(shí)，可以將 Lysis Buffer 與 Proteases 按 100 μL:1 μL 的比例混勻備用。 

b）組織應(yīng)取少量并盡量剪碎，以便裂解反應(yīng)更順利進(jìn)行。各組織推薦使用量：鼠尾：長度2-4 mm；鼠趾：1-4個(gè)；鼠臟器、腦：直徑2-4 mm；斑馬魚、線蟲、果蠅等昆蟲組織：1-4個(gè)；細(xì)胞數(shù)量:10⁵-10⁸個(gè)。斑馬魚、線蟲、果蠅等較小樣本的組織，可適當(dāng)減少Lysis Buffer至50-100 μL。昆蟲等外殼堅(jiān)硬的樣本，建議剪碎樣本并增加Proteases至4 μL。

c）55℃孵育，一般 5 min 即可滿足多數(shù) PCR 需求，如鼠尾、鼠耳等組織；若需要的 DNA 量較大或樣品較難裂解，可將時(shí)間延長至 30 min 或更久；裂解時(shí)間可在5-30 min之間調(diào)整，組織塊不需裂解，殘余的部分在后續(xù)離心步驟中可被除去。 

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