ELISA實(shí)驗(yàn):酶聯(lián)免疫吸附測定原理
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合的高靈敏度免疫檢測技術(shù),通過酶催化顯色反應(yīng)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物質(zhì)的定性或定量分析?。其核心原理如下:
基本原理?
固相包被?
將抗原或抗體固定在聚苯乙烯微孔板等固相載體表面,保持其免疫活性?。
酶標(biāo)記結(jié)合?
使用辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記抗體/抗原,形成酶標(biāo)復(fù)合物,既保留免疫活性又具備酶催化能力?。
顯色反應(yīng)?
加入底物(如TMB或PNPP)后,酶催化底物生成有色產(chǎn)物,顏色深淺與目標(biāo)物濃度成正比,通過酶標(biāo)儀測定吸光度值定量?。
Elisa的檢測原理
ELISA的定義和基本原理
ELISA的三個(gè)核心步驟
夾心法實(shí)驗(yàn)流程
ELISA的三種檢測類型
ELISA的總結(jié)
技術(shù)特點(diǎn)?
高靈敏度?:檢測限可達(dá)皮克級(pg/mL)?。
特異性強(qiáng)?:依賴抗原-抗體結(jié)合,單克隆抗體技術(shù)進(jìn)一步提升了特異性?。
方法多樣?:包括雙抗體夾心法(大分子)、競爭法(小分子)、間接法(抗體檢測)等?。
應(yīng)用場景?
醫(yī)學(xué)診斷?:HIV、HBV等傳染病檢測,腫瘤標(biāo)志物篩查?。
科研領(lǐng)域?:細(xì)胞因子定量、藥物藥效評價(jià)?。
食品安全?:獸藥殘留、過敏原檢測?。
關(guān)鍵注意事項(xiàng)?
加樣精度?:移液器需校準(zhǔn),避免氣泡或孔壁殘留導(dǎo)致誤差?。
溫度控制?:試劑與樣本需平衡至室溫,減少動(dòng)力學(xué)差異?。
洗滌?:手工拍板需垂直操作,機(jī)器洗板需檢查沖洗頭通暢?。
如需進(jìn)一步了解實(shí)驗(yàn)流程,可參考:ELISA操作視頻演示?。
注:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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