ELISA實驗中的抗原抗體互作：原理、優(yōu)化及常見問題

　　以下是天正信達(dá)關(guān)于ELISA實驗中?抗原抗體互作?的核心要點(diǎn)總結(jié)，涵蓋作用原理、實驗優(yōu)化及常見問題解決方案：

　　一、抗原抗體互作原理

　　結(jié)合機(jī)制?

　　抗原表位與抗體互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)通過氫鍵、疏水作用等非共價鍵特異性結(jié)合。

　　固相載體(如聚苯乙烯微孔板)通過物理吸附固定抗原/抗體，保留其免疫活性。

　　信號放大?

　　酶標(biāo)記抗體(如HRP標(biāo)記)催化底物顯色，將免疫反應(yīng)轉(zhuǎn)化為可檢測信號。

　　二、實驗優(yōu)化策略

　　包被條件優(yōu)化?

　　濃度?：抗原/抗體包被濃度需預(yù)實驗確定(通常1-10 μg/ml)。

　　緩沖液?：碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)優(yōu)于PBS，增強(qiáng)疏水吸附。

　　封閉劑選擇?

　　常用5% BSA或脫脂奶粉封閉非特異性位點(diǎn)，減少背景信號。

　　脂質(zhì)抗原需使用疏水表面及酒精溶解緩沖液。

　　溫育控制?

　　濕盒孵育或水浴溫育(37℃)避免邊緣孔蒸發(fā)差異。

　　三、常見問題與對策

　　問題? ?可能原因? ?解決方案?

　　高背景信號? 封閉不充分或抗體交叉反應(yīng) 更換封閉劑或優(yōu)化抗體濃度

　　低靈敏度? 包被抗原表位遮蔽或酶活性降低 調(diào)整抗原構(gòu)象或更換新鮮底物

　　邊緣效應(yīng)? 溫育濕度不均或孔間蒸發(fā)差異 使用濕盒孵育，邊緣孔填充緩沖液

　　重復(fù)性差? 加樣誤差或洗滌不 校準(zhǔn)移液器，增加洗滌次數(shù)

　　四、不同類型ELISA的互作特點(diǎn)

　　雙抗夾心法?：需配對抗體識別抗原不同表位，避免空間位阻。

　　競爭法?：待測抗原與酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合抗體，信號與濃度負(fù)相關(guān)。

　　間接法?：二抗放大信號，但需注意種屬交叉反應(yīng)。

　　通過上述優(yōu)化與問題排查，可顯著提升ELISA檢測的準(zhǔn)確性與重復(fù)性。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實際標(biāo)準(zhǔn)，具體請咨詢技術(shù)老師。

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